無菌接種步驟

  1.將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超凈臺上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，然后瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。

  2.材料吸干后，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對材料進行適當?shù)那懈?。如葉片切成0.5cm平方的小塊;莖切成含有一個節(jié)的小段。微莖尖要剝成只含1～2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械，防止交叉污染。

  3.用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。具體操作過程(以試管為例)是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口靠近酒精燈火焰，并將管口在火焰上方轉(zhuǎn)動，使管口里外灼燒數(shù)秒鐘。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內(nèi)，輕輕插入培養(yǎng)基上。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上，以放1～3塊為宜。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放外，其他尚無統(tǒng)一要求。接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒種。并用棉塞，塞好后，包上包口紙，包口紙里面也要過火。

  褐化

  解決方案：在培養(yǎng)基中添加活性碳可以防止植物組織自身的酚類物質(zhì)排泌和變褐老化，對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用。一般認為，活性碳主要吸附非極性物質(zhì)及色素大分子，可以減少一些有害物質(zhì)的影響，但是具體吸附的選擇性很差，溫度低時吸附力增強，溫度高時吸附力減弱，甚至會解吸附，通常使用濃度為0.5-10g/L。加入活性炭后使培養(yǎng)基變黑，對一些植物誘導生根有利。大量活性炭的加入會削弱瓊脂的凝固能力，因此要多加些瓊脂。很細的活性炭容易沉淀，因此通常在瓊脂將要凝固時，需輕輕搖動培養(yǎng)瓶。

  酚污染

  解決方案：植物外植體組織在接種時的切割面會溢泌一些酚類物質(zhì)，在接觸空氣中的氧氣后，其會氧化為相應的醌類物質(zhì)，產(chǎn)生可見的茶色、褐色或黑色，此即謂“酚污染”。在木本植物，尤其是熱帶木本植物及少量草本植物中，此現(xiàn)象較為嚴重。